कार्बोहाइड्रेट एंटीजन 153 (CA153) ट्यूमर मार्कर

नियत उपयोग

कार्बोहाइड्रेट एंटीजन 15-3 (CA153) (ELISA) के लिए डिटेक्शन किट। इसका उपयोग मानव सीरम में CA15-3 के मात्रात्मक परीक्षणों में किया जाता है।

सारांश और नैदानिक महत्व

कार्बोहाइड्रेट एंटीजन 15-3 (CA15-3) एक ग्लाइकोप्रोटीन स्तन कैंसर कोशिका का एक एपिटोप टुकड़ा MUC-1 है।.सीए15- 3 का प्रयोग स्तन कैंसर की प्रगति और मेटास्टेसिस, और क्लिनिकल परीक्षण उपचार और क्लिनिकल में रिलीप का निर्धारण करने के लिए किया जाता है।मेटास्टेटिक स्तन कैंसर के घावों पर विचार किया जा सकता हैजब उपचार प्रभावी होता है तो लगभग 50% रोगियों में CA15-3 की एकाग्रता में काफी कमी आई है।CA15-3 की सांद्रता 96% स्थानीय पुनरावृत्ति में रेडियोलॉजिकल और नैदानिक मानदंडों से अधिक संवेदनशील हैइस अभिकर्मक का उपयोग मुख्य रूप से कैंसर रोगियों की गतिशील निगरानी के लिए रोग की प्रगति या सहायक चिकित्सीय प्रभाव निर्धारित करने के लिए किया जाता है, लेकिन इसकी एकाग्रता ट्यूमर के आकार के साथ सहसंबंधित नहीं है,वृद्धिकुछ सौम्य रोगों (जैसे सौम्य स्तन रोग, सिरोसिस, हेपेटाइटिस आदि) में भी देखा जा सकता है कि सूचकांक में भिन्न-भिन्न डिग्री में वृद्धि हुई है।अतः, CA15-3 को कैंसर स्क्रीनिंग, प्रारंभिक निदान और अन्य उद्देश्यों के लिए सामान्य आबादी के लिए एक प्रभावी सामान्य स्क्रीनिंग परीक्षण नहीं माना जाना चाहिए।

सिद्धांत

सीए15-3 में एक सैंडविच सिद्धांत, एंजाइम-लिंक्ड इम्यूनोलॉजिकल सोर्बेंट परीक्षण का उपयोग किया जाता है। सीरम में सीए15-3 के स्तर को मापने के लिए, सीए15-3 के मोनोक्लोनल एंटीबॉडी के साथ लेपित प्लास्टिक कुएं किट में आपूर्ति की जाती हैं।रोगी का नमूना जोड़ा जाता है और, इनक्यूबेशन के दौरान, CA15-3, यदि मौजूद है, तो ठोस चरण एंटीबॉडी से जुड़ा होता है, जब HRP के साथ लेबल की गई मोनो-एंटीबॉडी जोड़ी जाती है, तो एक HRP-एंटीबॉडी CA15-3 एंटीबॉडी बनाती है।टीएमबी सब्सट्रेट जोड़ने के बाद, परिणाम ईआईए प्लेट रीडर द्वारा प्राप्त किया जाता है।

आपूर्ति किए गए अभिकर्मक

लेपित माइक्रोप्लेट: 1 प्लेट (8 × 12 कुएं), उपयोग करने के लिए तैयार। एंटी-CA15-3 एंटीबॉडी से लेपित और एल्यूमीनियम बैग में सील। खोलने के बाद नमी से बचाने के लिए सूखी सामग्री के साथ फिर से बंद करने योग्य बैग में स्ट्रिप्स निकालें।समाप्ति तिथि तक 2°C से 8°C पर रखें.

एचआरपी संयुग्मितः11 मिलीलीटर का 1 फ्लास्क, उपयोग के लिए तैयार है। इसमें HRP लेबल anti- CA15-3 और proclin-300 संरक्षक है। समाप्ति तिथि तक 2 ~ 8°C पर रखें।

नमूना पतला करनाउपयोग के लिए तैयार 11 मिलीलीटर का 1 फ्लास्क। समाप्ति तिथि तक 2°C से 8°C पर रखें।

कैलिब्रेटर:0.5 मिलीलीटर के 5 शीशी, उपयोग के लिए तैयार, S0 से S4 के साथ लेबल किए गए और CA-15-3 की एकाग्रता 0, 0 है।15,40,100250 U/ml 2~8°C पर समाप्ति तिथि तक रखें।

नियंत्रणः0.5 मिलीलीटर का 1 फ्लास्क, उपयोग के लिए तैयार है। समाप्ति तिथि तक 2 ~ 8°C पर रखें। एकाग्रता 53 ~ 98 U/ml है।

क्रोमोजेन ए:7 ml का 1 फ्लास्क, उपयोग के लिए तैयार है। H2O2 युक्त है। 2 ~ 8°C पर समाप्ति तिथि तक रखें।

क्रोमोजेन बी:7 मिलीलीटर का 1 फ्लास्क, उपयोग के लिए तैयार है। टीएमबी युक्त है। समाप्ति तिथि तक 2 ~ 8 डिग्री सेल्सियस पर रखें।

रोकें समाधानः1 7 ml का फ्लास्क, उपयोग के लिए तैयार है. H2SO4 युक्त है. 2 ~ 8°C पर समाप्ति तिथि तक रखें.

वाश बफर:15 मिलीलीटर का 1 फ्लास्क, 20 गुना केंद्रित, परीक्षण से पहले डीआयनयुक्त पानी से पतला। NaCl, फॉस्फेट और tween-20 युक्त। समाप्ति तिथि तक 2 ~ 8 °C पर स्टोर करें।

प्लेट सीलर:दो टुकड़े।

प्लास्टिक की फिर से बंद करने योग्य थैलीःएक सेट।

निर्देश पुस्तिका:एक प्रति।

तैयारी

1सभी नमूनों और अभिकर्मकों को कमरे के तापमान तक पहुंचने दें और उपयोग से पहले धीरे-धीरे उल्टा करके अच्छी तरह से मिलाएं।

2. वाश बफर तैयार करें वाश कंसंट्रेट को डीआयनयुक्त पानी के साथ 20 गुना पतला करके। पतला वाश समाधान कम से कम एक सप्ताह के लिए कमरे के तापमान पर स्थिर रहता है।

परीक्षण प्रक्रियाः

1.प्रयोग करने के लिए माइक्रोटिट्रेशन स्ट्रिप्स को चिह्नित करें. सभी कैलिब्रेटर और नियंत्रण सेट दोहराया जाना चाहिए.

2.कैलिब्रेटर/नियंत्रण के 100 यूएल को संबंधित कुओं में 100 यूएल नमूना पतला और 10 यूएल नमूना वितरित करें।

3.स्ट्रिप्स को प्लेट सीलर से ढक लें। माइक्रोटीटर प्लेट को फ्लैट बेंच पर घुमाकर धीरे-धीरे मिलाएं। प्लेट को 37°C पर 0.5 घंटे तक इनक्यूबेट करें।

4.प्रत्येक कुएं को 3 बार धोएं, प्रत्येक बार 10 सेकंड। (धोने की प्रक्रिया देखें)

5.प्रत्येक कुँए में 100 यूएल एचआरपीसीजोनागुट डालें।

6.स्ट्रिप्स को प्लेट सीलर से ढक लें। माइक्रोटाइटर प्लेट को फ्लैट बेंच पर घुमाकर धीरे-धीरे मिलाएं। प्लेट को 37°C पर 0.5 घंटे तक इनक्यूबेट करें।

7प्रत्येक कुएं को 3 बार, प्रत्येक बार 10 सेकंड तक धोएं (धोने की प्रक्रिया देखें) ।

8. डीप्रत्येक कुएं में 50 यूएल क्रोमोजेन एटो डालें।

9.प्रत्येक कुएं में 50 यूएल क्रोमोजेन बी डालें।

10.स्ट्रिप्स को ताजा प्लेट सीलर से ढक लें। माइक्रोटाइटर प्लेट को फ्लैट बेंच पर घुमाकर धीरे-धीरे मिलाएं। प्लेट को 37°C पर 15 मिनट तक इनक्यूबेट करें।

11प्रत्येक कुएं में 50 यूएल स्टॉपिंग सॉल्यूशन डालें और पूरी तरह से मिलाएं।

12. 10 मिनट के भीतर प्लेट का अवशोषण पढ़ें (पढ़ने की प्रक्रिया देखें)

प्रयोक्ताओं के लिए सावधानी

1- हाथ से किसी भी प्रकार के मुंह से पाइपेटिंग को रोकना चाहिए। प्रत्येक नमूने के लिए केवल एक बार में इस्तेमाल होने वाले टिप्स वाले पाइपेट्स का उपयोग करें।

2विभिन्न मास्टर लोटों से सामग्री न मिलाएं। समाप्ति तिथि के बाद किट घटकों का उपयोग न करें।

3सभी सामग्रियों को उपयोग से पहले कमरे के तापमान पर लाया जाना चाहिए।