मानव इम्यूनोडेफिशियेंसी वायरस के लिए मानव एंटी एचआईवी 1 और 2 एलिसा टेस्ट किट

3. परख प्रक्रिया

• उपयोग करने से पहले सभी घटकों को कमरे के तापमान तक पहुंचने दें।डीडीएच 2 ओ के साथ केंद्रित वॉश बफर 1:20 पतला करें।
• दो सकारात्मक और तीन नकारात्मक नियंत्रण सेट करें।नमूना मंदक के बिना संबंधित कुओं में दो प्रतियों में सकारात्मक नियंत्रण (एचआईवी -1 और एचआईवी -2) के साथ-साथ नकारात्मक नियंत्रण के 100μl बांटें।किसी भी तरल को जोड़े बिना पृष्ठभूमि नियंत्रण के रूप में एक खाली कुआं सेट करें।प्रत्येक परीक्षण कुएं में 50 μl नमूना मंदक जोड़ें, परीक्षण कुओं में 50 μl परीक्षण सीरम या प्लाज्मा अच्छी तरह मिलाएं।
• माइक्रोटिटर प्लेट को ह्यूमिडिफाइड बॉक्स में रखें और 30 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट करें।
• प्रतिक्रिया समाधान त्यागें और प्रत्येक अच्छी तरह से 350μl पतला धो बफर जोड़ें।15-30 सेकेंड के लिए भिगोने के बाद वॉश बफर को त्याग दें।धोने की प्रक्रिया को 5 बार दोहराएं और फिर प्लेट को जोर से पलट दें ताकि सारा पानी निकल जाए और कुछ सेकंड के लिए शोषक कागज पर कुओं के रिम को अवरुद्ध कर दें।
• प्रत्येक अच्छी तरह से एंजाइम संयुग्म के 100μl जोड़ें।1 मिनट के लिए फ्लैट बेंच पर माइक्रोटिटर प्लेट को घुमाकर धीरे से मिलाएं।खाली कुएं में एंजाइम संयुग्मित न जोड़ें..
• माइक्रोटिटर प्लेट को ह्यूमिडिफाइड बॉक्स में रखें और 30 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट करें।
• प्रत्येक कुएं को पतला 1X वॉश बफर से भरकर 5 बार धोएं, फिर प्लेट को जोर से उल्टा करके सारा पानी निकाल दें और कुछ सेकंड के लिए शोषक कागज पर कुओं के रिम को अवरुद्ध कर दें।
• प्रत्येक अच्छी तरह से सब्सट्रेट समाधान ए (एचआरपी सब्सट्रेट) के 50μl जोड़ें, फिर प्रत्येक कुएं में सब्सट्रेट समाधान बी (टीएमबी) के 50μl जोड़ें।धीरे से मिलाएं और 15 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट करें ।
• रंग प्रतिक्रिया को रोकने के लिए प्रत्येक कुएं में स्टॉप सॉल्यूशन की एक बूंद (50μl) जोड़ें।
• दोहरे फिल्टर प्लेट रीडर के साथ 450 एनएम/630 एनएम पर आयुध डिपो मूल्य पढ़ें।यह सिंगल फिल्टर प्लेट रीडर के साथ 450 एनएम पर OD मान को पढ़ने का विकल्प है।(सभी कुओं से सभी ओडी रीडिंग को सही करने के लिए खाली कुएं के OD मान का उपयोग करना