एमपीएक्सवी पीसीआर वानरपोक्स वायरस फ्रीज-ड्राई मल्टीप्लेक्स रीयल-टाइम पीसीआर डिटेक्शन

ऑपरेशन प्रक्रिया

1) न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण उचित निष्कर्षण किट का उपयोग करके नमूनों से डीएनए निकालें।यह अनुशंसा की जाती है कि निकासी के अंतिम चरण में न्यूक्लिक एसिड को लगभग 100 μl एलुशन बफर (TE या न्यूक्लेज़ मुक्त H2O) के साथ एलुट किया जाए।शुद्ध न्यूक्लिक एसिड को तुरंत उपयोग किया जाना चाहिए या -20°C पर संग्रहीत किया जाना चाहिए।

2) पॉजिटिव कंट्रोल तैयारी पॉजिटिव कंट्रोल को 12 महीने तक रिहाइड्रेशन से पहले परिवेश के तापमान पर संग्रहीत किया जा सकता है।इसे प्रयोग से पहले 250 μl TE बफर या न्यूक्लेज़ मुक्त H2O जोड़कर पुनः हाइड्रेट किया जाना चाहिए, 15-20 सेकंड के लिए कम गति पर घुमावदार, और 15-20 सेकंड के लिए कम गति पर केन्द्रापसारक। तुरंत उपयोग करें या -20°C पर स्टोर करें।

3) वास्तविक समय में आरटी-पीसीआर मिश्रण तैयार करना

A) वैक्यूम पैकेज खोलें और अभिकर्मक युक्त 8-ट्यूब स्ट्रिप्स निकालें। जांचें कि गोली ट्यूब के नीचे है (यदि आवश्यक हो तो ट्यूबों की संख्या को आवश्यकतानुसार काटें) ।यदि प्रदान किए गए ट्यूब आपके उपकरण के साथ संगत नहीं हैं, रिएजेंट पेलेट को अपने उपकरण के साथ संगत एक ऑप्टिकल ट्यूब में स्थानांतरित करें।

B) ट्यूबों को खोलें और ढक्कन (रियल टाइम पीसीआर मशीनों के लिए उपयुक्त नहीं) को फेंक दें, और नीचे के रूप में बर्फ पर प्रतिक्रिया मिश्रण तैयार करें।

* न्यूक्लेज़ मुक्त पानी का उपयोग नकारात्मक नियंत्रण के रूप में किया जा सकता है।

C) ट्यूबों को ऑप्टिकल कैप या ऑप्टिकल सील फिल्म के साथ 96-छेद प्लेट से सील करें (सप्लाई नहीं की गई) ।

घ) ट्यूबों को 10 से 15 सेकंड के लिए कम गति से घुमाएं, और 20 सेकंड के लिए 3000 आरपीएम पर सेंट्रीफ्यूज करें और उन्हें वास्तविक समय पीसीआर उपकरण में रखें।

3) आरटी-पीसीआर सेटअपः प्रतिक्रिया मात्रा को 25μl पर सेट करें, और पीसीआर प्रवर्धन प्रक्रिया नीचे दी गई है। एफएएम (एन जीन के लिए), एचईएक्स (ई जीन के लिए),आरओएक्स (ओर्फ1एबी के लिए) और सीवाई5 (आरएनजेड पी जीन के लिए) 60°सी पर फ्लोरोसेंस, और निष्क्रिय संदर्भ के रूप में NONE का चयन करें।
4) परिणाम विश्लेषण और व्याख्या उपकरण के निर्देशों के अनुसार सीमा रेखा निर्धारित करें।

क) गुणवत्ता नियंत्रण:

B) नमूना परिणाम की व्याख्या

तकनीकी मापदंडः