एलिसा एलएच टेस्ट स्ट्रिप आईएसओ13485 ल्यूटिनाइजिंग हार्मोन टेस्ट किट 96 पीसी

एलएच एलिसा किट ल्यूटिनाइजिंग हार्मोन

1. इच्छित उपयोग

मानव सीरम में ल्यूटिनाइजिंग हार्मोन के इन विट्रो मात्रात्मक निर्धारण के लिए इम्यूनोसे।

2. सारांश

• एलएच (ल्यूटिनाइजिंग हार्मोन), एफएसएच (कूप उत्तेजक हार्मोन) के साथ, गोनैडोट्रोपिन परिवार से संबंधित है।एलएच और एफएसएच विकास को नियंत्रित और उत्तेजित करते हैं और गोनाड (अंडाशय और वृषण) के कार्य सहक्रियात्मक रूप से।जैसे एफएसएच, टीएसएच और एचसीजी, एलएच एक ग्लाइकोप्रोटीन है जिसमें दो सबयूनिट (α- और β-चेन) होते हैं।(1, 2, 3) इस प्रोटीओहोर्मोन, जिसमें 121 अमीनो एसिड और तीन चीनी श्रृंखलाएं होती हैं, का आणविक भार 29500 डाल्टन होता है।महिलाओं में, गोनैडोट्रोपिन मासिक धर्म चक्र को नियंत्रित करने के लिए हाइपोथैलेमस-पिट्यूटरी-अंडाशय विनियमन सर्किट के भीतर कार्य करते हैं।
• एलएच और एफएसएच पूर्वकाल पिट्यूटरी के गोनैडोट्रोपिक कोशिकाओं से दालों में जारी किए जाते हैं और रक्तप्रवाह से अंडाशय तक जाते हैं।यहां गोनैडोट्रोपिन कूप के विकास और परिपक्वता को प्रोत्साहित करते हैं और इसलिए एस्ट्रोजेन और प्रोजेस्टेरोन के जैवसंश्लेषण को प्रोत्साहित करते हैं।उच्चतम एलएच-सांद्रता मध्य-चक्र शिखर के दौरान होती है और ओव्यूलेशन और कॉर्पस ल्यूटियम के गठन को प्रेरित करती है, जिसका प्रमुख स्राव उत्पाद प्रोजेस्टेरोन है।वृषण की लेडिग कोशिकाओं में, एलएच टेस्टोस्टेरोन के उत्पादन को उत्तेजित करता है।एलएच एकाग्रता के निर्धारण का उपयोग हाइपोथैलेमस-पिट्यूटरी-गोनाड प्रणाली के भीतर की शिथिलता को दूर करने में किया जाता है।संयोजन में एलएच का निर्धारण एफएसएच के साथ निम्नलिखित संकेतों के लिए उपयोग किया जाता है: गुणसूत्र विपथन (जैसे टर्नर सिंड्रोम), पॉलीसिस्टिक अंडाशय (पीसीओ) के साथ जन्मजात रोग, एमेनोरिया, रजोनिवृत्ति सिंड्रोम और संदिग्ध लेडिग सेल अपर्याप्तता के कारणों को स्पष्ट करते हैं।(1, 4, 5)

3. परीक्षण सिद्धांत

सैंडविच सिद्धांत।परख की कुल अवधि: 80 मिनट।

• नमूना, एंटी-एलएच लेपित माइक्रोवेल और एंटी-एलएच लेबल वाले एंजाइम संयुक्त हैं।

• ऊष्मायन के दौरान, नमूने में मौजूद एलएच को प्रतिक्रिया करने की अनुमति दी जाती है

एक साथ दो एंटीबॉडी के साथ, जिसके परिणामस्वरूप एलएच अणु होते हैं

ठोस चरण और एंजाइम से जुड़े एंटीबॉडी के बीच सैंडविच।

• धोने के बाद, ठोस चरण, नमूने के भीतर एलएच और प्रतिरक्षाविज्ञानी प्रतिक्रियाओं द्वारा एंजाइम से जुड़े एंटीबॉडी के बीच एक जटिल उत्पन्न होता है।

• फिर इस परिसर द्वारा सब्सट्रेट समाधान जोड़ा और उत्प्रेरित किया जाता है, जिसके परिणामस्वरूप एक क्रोमोजेनिक प्रतिक्रिया होती है।परिणामी क्रोमोजेनिक प्रतिक्रिया को अवशोषण के रूप में मापा जाता है।

• अवशोषण नमूने में एलएच की मात्रा के समानुपाती होता है।

अभिकर्मकों

प्रदान की गई सामग्री

• लेपित माइक्रोप्लेट, 8 x 12 स्ट्रिप्स, 96 कुएं, माउस मोनोक्लोनल के साथ पूर्व-लेपित

एलएच विरोधी।

• अंशशोधक, 6 शीशियाँ, 1 मिली प्रत्येक, उपयोग के लिए तैयार;सांद्रता: 0 (ए), 5 (बी), 20 (सी), 50 (डी), 100 (ई) और 200 (एफ) एमआईयू / एमएल।

• एंजाइम कंजुगेट, 1 शीशी, 11 एमएल एचआरपी (हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज) लेबल माउस मोनोक्लोनल एंटी-एलएच ट्रिस-एनएसीएल बफर में बीएसए (गोजातीय सीरम एल्ब्यूमिन) होता है।इसमें 0.1% ProClin300 प्रिजर्वेटिव है।

• सब्सट्रेट, 1 शीशी, 11ml, उपयोग के लिए तैयार, (tetramethylbenzidine) TMB।

• स्टॉप सॉल्यूशन, 1 शीशी, 6.0 मिली 1 mol/L सल्फ्यूरिक एसिड।

• वॉश सॉल्यूशन कॉन्सेंट्रेट, 1 शीशी, 25 एमएल (40X कंसंट्रेट), पीबीएस-ट्वीन

धोने का घोल।

• आईएफयू, 1 प्रति।

• प्लेट का ढक्कन: 1 टुकड़ा।

आवश्यक सामग्री (लेकिन प्रदान नहीं की गई)

• 450nm और 620nm तरंग दैर्ध्य शोषक क्षमता के साथ माइक्रोप्लेट रीडर।

• माइक्रोप्लेट वॉशर।

• इन्क्यूबेटर

4. परीक्षण प्रक्रिया

• केवल आवश्यक कुओं की संख्या का उपयोग करें और माइक्रोप्लेट्स के कुओं को के लिए प्रारूपित करें

प्रत्येक अंशशोधक और नमूने की परख की जानी है।

• प्रत्येक कुएं में 25 डिग्री सेल्सियस अंशशोधक या नमूने जोड़ें।

• प्रत्येक कुएं में 100 μL एंजाइम संयुग्म जोड़ें।

• मिक्स करने के लिए माइक्रोप्लेट को 30 सेकंड के लिए धीरे से हिलाएं।

• प्लेट को प्लेट के ढक्कन से ढक दें और 37 डिग्री सेल्सियस पर 60 मिनट के लिए इनक्यूबेट करें।

• सूक्ष्म प्लेट की सामग्री को सफाई या आकांक्षा द्वारा त्यागें।यदि

अब्सॉर्बेंट पेपर से प्लेट को सुखाना, टैप करना और ब्लॉट करना।

• 350 μL धोने के घोल, छानना (नल और धब्बा) या महाप्राण जोड़ें।कुल 5 वॉश के लिए 4 अतिरिक्त बार दोहराएं।एक स्वचालित माइक्रोप्लेट स्ट्रिप वॉशर का उपयोग किया जा सकता है।धोने के अंत में, प्लेट को उल्टा कर दें और किसी भी अवशिष्ट वॉश सॉल्यूशन को अब्सॉर्बेंट पेपर पर टैप करें।

• प्रत्येक कुएं में 100 μL सब्सट्रेट जोड़ें।

• 20 मिनट के लिए प्रतिक्रिया के लिए अंधेरे में परिवेश के तापमान (18-25 ℃) पर सेते हैं।सबस्टेट जोड़ने के बाद प्लेट को हिलाएं नहीं।

• प्रत्येक कुएं में 50 μl स्टॉप सॉल्यूशन डालें।

• कुओं के भीतर तरल मिलाने के लिए 15-20 सेकंड के लिए हिलाएं।के लिए महत्वपूर्ण है

सुनिश्चित करें कि नीला रंग पूरी तरह से पीले रंग में बदल जाता है।

• 450 एनएम (620 से 630 एनएम का उपयोग करके) पर प्रत्येक कुएं का अवशोषण पढ़ें

माइक्रो प्लेट रीडर में अच्छी तरह से खामियों को कम करने के लिए रेफरेंस वेवलेंथ)।