ईबीवी-वीसीए आईजीए एबी टेस्ट एलिसा किट एंजाइम इम्यूनोसे टेस्ट प्लाज्मा नमूना

EBV-VCA IgA Ab एलिसा किट कैटलॉग नंबर: BE501A
एपस्टीन-बार वायरस (EBV) के वायरल कैप्सिड एंटीजन (VCA) के लिए IgA एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए एंजाइम इम्युनोसे।
 
1. परख का सिद्धांत
EBV-VCA IgA Ab ELISA किट एक डिटेक्शन सिस्टम का उपयोग करता है जहां माइक्रोप्लेट कुओं को अत्यधिक एंटीजेनिक सेगमेंट EBV-VCA के अनुरूप पुनः संयोजक एंटीजन के साथ लेपित किया जाता है।सीरम या प्लाज्मा के नमूने, नियंत्रण कुओं में जोड़े जाते हैं।ऊष्मायन के दौरान, नमूने में मौजूद ईबीवी-वीसीए के लिए विशिष्ट आईजीए एंटीबॉडी माइक्रोप्लेट कुओं पर तय किए गए पुनः संयोजक प्रतिजन से बंधे होंगे।अनबाउंड सामग्री को हटाने के लिए कुओं को धोया जाता है, और मानव-विरोधी IgA पेरोक्सीडेज संयुग्म एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स से बंध जाएगा और अतिरिक्त अनबाउंड एंजाइम संयुग्मों को फिर से धोने से हटा दिया जाता है।एंजाइम सब्सट्रेट, टेट्रामेथिलबेन्ज़िडाइन (टीएमबी), ऊष्मायन पर जोड़ा जाता है सब्सट्रेट बाध्य एंजाइम द्वारा हाइड्रोलाइज्ड हो जाएगा और ईबीवी-वीसीए आईजीए एंटीबॉडी वाले कुओं में एक नीला या नीला-हरा रंग विकसित होता है।सल्फ्यूरिक अम्ल मिलाने से एन्जाइम अभिक्रिया रुक जाती है।विकसित रंग की तीव्रता को स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक रूप से 450nm (450 एनएम/630 एनएम) पर पढ़ा जाता है और यह नमूने में मौजूद एंटीबॉडी की मात्रा के समानुपाती होता है।
अभिकर्मकों
 
2. किट के साथ प्रदान की जाने वाली सामग्री:

 
3. परख प्रक्रिया

1. एलिसा किट (सभी अभिकर्मक) और नमूनों को उपयोग करने से पहले (लगभग 30 मिनट) कमरे के तापमान पर लाएं।
2. डीडीएच2ओ के साथ केंद्रित वाश बफर 1:19 पतला करें।उदाहरण के लिए, वॉश बफर कॉन्संट्रेट के 5 मिलीलीटर को विआयनीकृत या आसुत जल के साथ कुल 100 मिलीलीटर की मात्रा में पतला किया जाना चाहिए।
3. प्रत्येक परीक्षण के लिए, पृष्ठभूमि नियंत्रण के रूप में एक रिक्त कुएं, दो सकारात्मक और तीन नकारात्मक नियंत्रण सेट करें।अलग-अलग कुओं में 100 मिलीलीटर सकारात्मक नियंत्रण और नकारात्मक नियंत्रण डुप्लिकेट बांटें।न तो नमूने और न ही एचआरपी-कॉन्जुगेट को खाली कुएं में जोड़ा जाना चाहिए।
4. नियंत्रण को छोड़कर अलग-अलग परीक्षण कुओं में नमूना कमजोर पड़ने के 100 मिलीलीटर बांटें।
5. परीक्षण कुओं में प्रत्येक परीक्षण नमूने के 10 मिलीलीटर जोड़ें;मिश्रण करने के लिए भंवर।
6. 37°C . पर 30 मिनट के लिए सेते हैं
7. प्रत्येक कुएं को डाइल्यूटेड वॉश बफर से भरकर 5 बार धोएं, फिर प्लेट को जोर से उल्टा करके सारा पानी निकाल दें और कुछ सेकंड के लिए शोषक कागज पर कुओं के रिम को अवरुद्ध कर दें।
8. प्रत्येक अच्छी तरह से एंजाइम संयुग्म के 100 मिलीलीटर जोड़ें ।1 मिनट के लिए फ्लैट बेंच पर माइक्रोटिटर प्लेट को घुमाकर धीरे से मिलाएं।खाली कुएं में एंजाइम संयुग्मित न जोड़ें।
9. 37°C . पर 20 मिनट के लिए सेते हैं
10. प्लेट को चरण 7 के अनुसार 5 बार धोएं।
11. प्रत्येक कुएं में सब्सट्रेट सॉल्यूशन ए (एचआरपी-सब्सट्रेट) की एक बूंद (50 मिली) डालें, फिर प्रत्येक कुएं में सबस्ट्रेट सॉल्यूशन बी (टीएमबी) की एक बूंद (50 मिली) डालें।धीरे से मिलाएं और 37 डिग्री सेल्सियस पर 30 मिनट के लिए इनक्यूबेट करें।.
12. रंग प्रतिक्रिया को रोकने के लिए प्रत्येक कुएं में स्टॉप सॉल्यूशन की एक बूंद (50 मिली) मिलाएं।दोहरे फिल्टर प्लेट रीडर के साथ 450 एनएम/630 एनएम पर आयुध डिपो मूल्य पढ़ें।यह सिंगल फिल्टर प्लेट रीडर के साथ 450 एनएम पर OD मान को पढ़ने का विकल्प है।(सभी कुओं से सभी ओडी रीडिंग को सही करने के लिए खाली कुएं के OD मान का उपयोग करना)