आईएसओ थायरोक्सिन टी 4 एलिसा टेस्ट फ्री टी 4 सीरम टेस्ट 110 मिनट पढ़ने का समय

T4 थायरोक्सिन
आरईएफ: डीएस177703 96 परीक्षण

1. इच्छित उपयोग
मानव सीरम में थायरोक्सिन के इन विट्रो मात्रात्मक निर्धारण के लिए इम्यूनोसे।

2. सारांश
हार्मोन थायरोक्सिन (T4) थायरॉयड ग्रंथि द्वारा स्रावित मुख्य उत्पाद है और हाइपोथैलेमस-पूर्वकाल पिट्यूटरी-थायरॉयड विनियमन प्रणाली का एक अभिन्न अंग है।इसमें चयापचय को अनाबोलिक रूप से प्रभावित करने का कार्य है।थायरोक्सिन थायरॉयड ग्रंथि में दो डीआईटी अणुओं (3,5-डायोडोटायरोसिन) से युग्मन प्रतिक्रिया में बनता है।यह थायराइड फॉलिकल्स के लुमिना में थायरोग्लोबुलिन से बंधे होते हैं और टीएसएच के प्रभाव में आवश्यकतानुसार स्रावित होते हैं।(1, 2) सीरम में कुल थायरोक्सिन (T4) का प्रमुख भाग (>99%) प्रोटीन बाध्य रूप में मौजूद होता है।चूंकि सीरम में परिवहन प्रोटीन की सांद्रता बहिर्जात और अंतर्जात प्रभावों के अधीन होती है, इसलिए सीरम में थायराइड हार्मोन एकाग्रता के आकलन में बाध्यकारी प्रोटीन की स्थिति को भी ध्यान में रखा जाना चाहिए।यदि इसे अनदेखा किया जाता है, तो बाध्यकारी प्रोटीन में परिवर्तन (उदाहरण के लिए, गर्भावस्था के दौरान या नेफ्रोटिक सिंड्रोम आदि की उपस्थिति में एस्ट्रोजन युक्त तैयारी के कारण) थायराइड चयापचय स्थिति के गलत आकलन का कारण बन सकता है।(3, 4, 5, 6, 7) टी 4 के निर्धारण का उपयोग निम्नलिखित संकेतों के लिए किया जा सकता है: हाइपरथायरायडिज्म का पता लगाना, प्राथमिक और माध्यमिक हाइपोथायरायडिज्म का पता लगाना और टीएसएच-दमन चिकित्सा की निगरानी।(8)
T4 परख विशेष रूप से T4 के खिलाफ निर्देशित एंटीबॉडी के साथ एक प्रतिस्पर्धी परीक्षण सिद्धांत को नियोजित करता है।अंतर्जात T4, 8-एनिलिनो-1-नेफ्थलीन सल्फोनिक एसिड (ANS) की क्रिया द्वारा जारी किया गया।

3. अभिकर्मक सामग्री प्रदान की गई
• लेपित माइक्रोप्लेट, 8 x 12 स्ट्रिप्स, 96 कुएं, T4 व्युत्पन्न के साथ पूर्व-लेपित।
• अंशशोधक, 6 शीशियाँ, 1 मिली प्रत्येक, उपयोग के लिए तैयार;सांद्रता: 0 (ए), 2.5 (बी), 5 (सी), 10 (डी), 15 (ई) और 30 (एफ) माइक्रोग्राम / डीएल।
• Tris-NaCl बफर में BSA (गोजातीय सीरम एल्ब्यूमिन) युक्त एनजाइम संयुग्म, 1 शीशी, 6.0 मिली HRP (हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज) लेबल वाला माउस मोनोक्लोनल T4।0.2% ProClin300 संरक्षक शामिल हैं।ANS 1.5 मिलीग्राम/एमएल।
• सब्सट्रेट, 1 शीशी, 11ml, उपयोग के लिए तैयार, (tetramethylbenzidine) TMB।
• स्टॉप सॉल्यूशन, 1 शीशी, 6.0 मिली 1 mol/l सल्फ्यूरिक एसिड।
• वॉश सॉल्यूशन कॉन्सेंट्रेट, 1 शीशी, 25 मिली (40X कॉन्संट्रेटेड), पीबीएस-ट्वीन वॉश सॉल्यूशन।
• आईएफयू, 1 प्रति।
• प्लेट का ढक्कन: 1 टुकड़ा।

4. आवश्यक सामग्री (लेकिन प्रदान नहीं की गई)
• 450nm और 620nm तरंग दैर्ध्य शोषक क्षमता के साथ माइक्रोप्लेट रीडर।
• माइक्रोप्लेट वॉशर।
• इनक्यूबेटर।
• प्लेट शेकर।
• माइक्रोपिपेट और मल्टीचैनल माइक्रोपिपेट 1.5% से बेहतर की सटीकता के साथ 50μl वितरित करते हैं।
• शोषक कागज।
• आसुत जल

परीक्षण प्रक्रिया

सुनिश्चित करें कि माप से पहले मरीजों के नमूने, अंशशोधक और नियंत्रण परिवेश के तापमान (18-25 ℃) पर हैं।उपयोग करने से पहले धीरे-धीरे इनवर्टिंग के माध्यम से सभी अभिकर्मकों को मिलाएं।

• केवल आवश्यक कुओं की संख्या का उपयोग करें और प्रत्येक अंशशोधक और नमूने की परख के लिए माइक्रोप्लेट्स के कुओं को प्रारूपित करें।• प्रत्येक कुएं में 50 µ l अंशशोधक या नमूने जोड़ें ।

• प्रत्येक कुएं में 50 µ एल एंजाइम संयुग्म जोड़ें।

• मिक्स करने के लिए माइक्रोप्लेट को 30 सेकंड के लिए धीरे से हिलाएं।

• प्लेट को प्लेट के ढक्कन से ढक दें और 37 ℃ पर 60 मिनट के लिए इनक्यूबेट करें।

• सूक्ष्म प्लेट की सामग्री को सफाई या आकांक्षा द्वारा त्यागें।अगर सड़ रहा है, तो प्लेट को अब्सॉर्बेंट पेपर से सुखाकर टैप करें और ब्लॉट करें।

• धो समाधान के 350 μl जोड़ें, छानना (नल और धब्बा) या महाप्राण।कुल 5 वॉश के लिए 4 अतिरिक्त बार दोहराएं।एक स्वचालित माइक्रोप्लेट स्ट्रिप वॉशर का उपयोग किया जा सकता है।धोने के अंत में, प्लेट को उल्टा कर दें और किसी भी अवशिष्ट वॉश सॉल्यूशन को अब्सॉर्बेंट पेपर पर टैप करें।

• प्रत्येक अच्छी तरह से सब्सट्रेट के 100 µ एल जोड़ें ।

• 20 मिनट के लिए प्रतिक्रिया के लिए अंधेरे में परिवेश के तापमान (18-25 ℃) पर कवर और इनक्यूबेट करें।सबस्टेट जोड़ने के बाद प्लेट को हिलाएं नहीं।• प्रत्येक कुएं में 50 µ l स्टॉप सॉल्यूशन जोड़ें ।

• कुओं के भीतर तरल मिलाने के लिए 15-20 सेकंड के लिए हिलाएं।यह सुनिश्चित करना महत्वपूर्ण है कि नीला रंग पूरी तरह से पीले रंग में बदल जाए।

• माइक्रो प्लेट रीडर में प्रत्येक कुएं के अवशोषण को 450 एनएम (620 से 630 एनएम का उपयोग करके संदर्भ तरंग दैर्ध्य के रूप में अच्छी तरह से खामियों को कम करने के लिए) पढ़ें।स्टॉप सॉल्यूशन जोड़ने के 30 मिनट के भीतर परिणामों को पढ़ा जाना चाहिए