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उत्पाद विवरण:
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| उद्देश्य: | केवल अनुसंधान उपयोग के लिए | भंडारण: | 2-8 ℃ |
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| विनिर्देश: | 48 कुएँ/96 कुएँ | तरीका: | सैंडविच |
| Cat. बिल्ली। No. नहीं।: | इन-मो1153 | सीवी(%): | एसडी/माध्यX100 |
| प्रमुखता देना: | ई कैडरिन एलिसा किट,माउस ई कैड एलिसा किट,रिसर्च ई कैडरिन एलिसा किट |
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माउस ई-कैडरिन, ई-कैड एलिसा किट
यह एलिसा किट विधि के रूप में सैंडविच-एलिसा का उपयोग करती है।इस किट में प्रदान की गई माइक्रोएलिसा स्ट्रिपप्लेट को ई-कैड के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी के साथ पूर्व-लेपित किया गया है।मानकों या नमूनों को उपयुक्त माइक्रोएलिसा स्ट्रिपप्लेट कुओं में जोड़ा जाता है और विशिष्ट एंटीबॉडी के साथ जोड़ा जाता है।फिर एक हॉर्सरैडिश पेरोक्साइड (एचआरपी) - ई-कैड के लिए विशिष्ट संयुग्मित एंटीबॉडी को प्रत्येक माइक्रोएलिसा स्ट्रिपप्लेट में अच्छी तरह से जोड़ा जाता है और इनक्यूबेट किया जाता है।मुक्त घटक धुल जाते हैं।टीएमबी सब्सट्रेट समाधान प्रत्येक कुएं में जोड़ा जाता है।केवल वे कुएं जिनमें ई-कैड और एचआरपी संयुग्मित ई-कैड एंटीबॉडी होते हैं, वे नीले रंग के दिखाई देंगे और फिर स्टॉप सॉल्यूशन को जोड़ने के बाद पीले हो जाएंगे।ऑप्टिकल घनत्व (OD) को 450 एनएम के तरंग दैर्ध्य पर स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक रूप से मापा जाता है।OD मान E-Cad की सांद्रता के समानुपाती होता है।आप नमूनों के OD की तुलना मानक वक्र से करके नमूनों में E-Cad की सांद्रता की गणना कर सकते हैं।
किट के साथ उपलब्ध कराई गई सामग्री
| किट के साथ उपलब्ध कराई गई सामग्री | 48 निर्धारण | 96 निश्चय | भंडारण | |
| 1 | उपयोगकर्ता पुस्तिका | 1 | 1 | आर टी |
| 2 | क्लोजर प्लेट झिल्ली | 2 | 2 | आर टी |
| 3 | सीलबंद बैग | 1 | 1 | आर टी |
| 4 | माइक्रोएलिसा स्ट्रिपप्लेट | 1 | 1 | 2-8℃ |
| 5 | मानक: 108पीजी/एमएल | 0.5 मिली × 1 बोतल | 0.5 मिली × 1 बोतल | 2-8℃ |
| 6 | मानक मंदक | 1.5 मिली × 1 बोतल | 1.5 मिली × 1 बोतल | 2-8℃ |
| 7 | एचआरपी-संयुग्म अभिकर्मक | 3 मिलीलीटर × 1 बोतल | 6 मिलीलीटर × 1 बोतल | 2-8℃ |
| 8 | नमूना मंदक | 3 मिलीलीटर × 1 बोतल | 6 मिलीलीटर × 1 बोतल | 2-8℃ |
| 9 | क्रोमोजेन समाधान ए | 3 मिलीलीटर × 1 बोतल | 6 मिलीलीटर × 1 बोतल | 2-8℃ |
| 10 | क्रोमोजेन समाधान बी | 3 मिलीलीटर × 1 बोतल | 6 मिलीलीटर × 1 बोतल | 2-8℃ |
| 1 1 | समाधान रोकें | 3 मिलीलीटर × 1 बोतल | 6 मिलीलीटर × 1 बोतल | 2-8℃ |
| 12 | धो समाधान | 20 मिली (20X) × 1 बोतल | 20 मिली (30X) × 1 बोतल | 2-8℃ |
प्रक्रिया
मानकों का कमजोर पड़ना
1. माइक्रोएलिसा स्ट्रिपप्लेट में मानकों के लिए दस कुएं निर्धारित हैं।वेल 1 और वेल 2 में, 100μl स्टैंडर्ड सॉल्यूशन और 50μl स्टैंडर्ड डाइल्यूशन बफर को मिलाया जाता है और अच्छी तरह मिलाया जाता है।वेल 3 और वेल 4 में, वेल 1 और वेल 2 से 100μl घोल क्रमशः मिलाया जाता है।फिर 50μl मानक कमजोर पड़ने वाले बफर को जोड़ा जाता है और अच्छी तरह मिलाया जाता है।वेल 3 और वेल 4 से 50μl घोल को त्याग दिया जाता है। वेल 5 और वेल 6 में, वेल 3 और वेल 4 से 50μl घोल क्रमशः मिलाया जाता है।फिर 50μl मानक कमजोर पड़ने वाले बफर को जोड़ा जाता है और अच्छी तरह मिलाया जाता है।वेल 7 और वेल 8 में क्रमशः वेल 5 और वेल 6 से 50μl घोल मिलाया जाता है।फिर 50μl मानक कमजोर पड़ने वाले बफर को जोड़ा जाता है और अच्छी तरह मिलाया जाता है।वेल 9 और वेल 10 में क्रमशः वेल 7 और वेल 8 से 50μl घोल मिलाया जाता है।फिर 50μl मानक कमजोर पड़ने वाले बफर को जोड़ा जाता है और अच्छी तरह मिलाया जाता है।50μl घोल को वेल 9 और वेल 10 से निकाल दिया जाता है। कमजोर पड़ने के बाद, सभी कुओं में कुल मात्रा 50μl होती है और सांद्रता क्रमशः 24ng/ml,16 ng/ml,8 ng/ml,4ng/ml और 2ng/ml होती है। .
2. माइक्रोएलिसा स्ट्रिपप्लेट में, एक कुएं को खाली नियंत्रण के रूप में खाली छोड़ दें।नमूना कुओं में, 40μl नमूना कमजोर पड़ने बफर और 10μl नमूना जोड़ा जाता है (कमजोर पड़ने का कारक 5 है)।नमूने को कुएं की दीवार को छुए बिना तल पर लोड किया जाना चाहिए।हल्के से मिलाते हुए अच्छी तरह मिलाएं।
3. इनक्यूबेशन: क्लोजर प्लेट मेम्ब्रेन से सील करने के बाद 37 ℃ पर 30 मिनट इनक्यूबेट करें।
4. कमजोर पड़ने: आसुत जल के साथ केंद्रित धुलाई बफर को पतला करें (96 टी के लिए 30 बार और 48 टी के लिए 20 बार)।
5. धुलाई: क्लोजर प्लेट मेम्ब्रेन को सावधानी से छीलें, एस्पिरेट करें और वॉश सॉल्यूशन से फिर से भरें।30 सेकंड के लिए आराम करने के बाद धोने के घोल को त्याग दें।धोने की प्रक्रिया को 5 बार दोहराएं।
6. खाली नियंत्रण अच्छी तरह से छोड़कर प्रत्येक कुएं में 50 μl एचआरपी-संयुग्म अभिकर्मक जोड़ें।
7. चरण 3 में वर्णित के रूप में ऊष्मायन।
8. चरण 5 में वर्णित अनुसार धुलाई करें।
9. रंग: प्रत्येक कुएं में 50 μl क्रोमोजेन सॉल्यूशन ए और 50 μl क्रोमोजेन सॉल्यूशन बी मिलाएं, धीरे से मिलाते हुए मिलाएं और 37 ℃ पर 15 मिनट के लिए इनक्यूबेट करें।कृपया रंग के दौरान प्रकाश से बचें।
10. समाप्ति: प्रतिक्रिया को समाप्त करने के लिए प्रत्येक कुएं में 50 μl स्टॉप सॉल्यूशन जोड़ें।कुएं का रंग नीले से पीले रंग में बदलना चाहिए।
11. माइक्रोटाइटर प्लेट रीडर का उपयोग करके 450 एनएम पर अवशोषक ओडी पढ़ें।रिक्त नियंत्रण कुएं का OD मान शून्य के रूप में सेट किया गया है।स्टॉप सॉल्यूशन डालने के बाद 15 मिनट के भीतर परख की जानी चाहिए।
शुद्धता
इंट्रा-परख प्रेसिजन (एक परख के भीतर परिशुद्धता): निम्न, मध्यम और उच्च स्तर के ई-कैड वाले 3 नमूनों का क्रमशः एक प्लेट पर 20 बार परीक्षण किया गया।
इंटर-एसे प्रेसिजन (एसेज़ के बीच प्रेसिजन): निम्न, मध्यम और उच्च स्तर के ई-कैड वाले 3 नमूनों का परीक्षण 3 अलग-अलग प्लेटों पर किया गया, प्रत्येक प्लेट में 8 प्रतिकृतियां।
सीवी (%) = एसडी / माध्य X100
इंट्रा-परख: सीवी<10%
अंतर-परख: सीवी<12%
परख रेंज
0.6pg/एमएल -80pg/एमएल
संवेदनशीलता:
0.1 पीजी / एमएल
व्यक्ति से संपर्क करें: Mr. Steven
दूरभाष: +8618600464506
