इंटरल्यूकिन-2 रिसेप्टर सबयूनिट अल्फा माउस आईएल2आर सीडी25 आईएल2-आरए एलिसा किट

माउस इंटरल्यूकिन-2 रिसेप्टर सबयूनिट अल्फा;आईएल2आर;CD25;IL2-RA एलिसा किट

किट के साथ उपलब्ध कराई गई सामग्री

नमूना आवश्यकताएं

• सीरम-कमरे के तापमान पर जमावट 10-20 मिनट, 2000-3000 आरपीएम की गति से 20-मिनट केंद्रापसारक सतह पर तैरनेवाला हटा दें, यदि वर्षा दिखाई दी, तो केन्द्रापसारक फिर से।
• प्लाज्मा-एक थक्कारोधी के रूप में उपयुक्त EDTA या साइट्रेट प्लाज्मा का उपयोग करें, 2000-3000 आरपीएम की गति से 10-20 मिनट, सेंट्रीफ्यूजेशन 20-मिनट मिलाएं, सतह पर तैरनेवाला हटा दें, यदि वर्षा दिखाई दी, तो केन्द्रापसारक फिर से।
• मूत्र-संग्रह एक बाँझ कंटेनर पर मुकदमा, 2000-3000 आरपीएम की गति से 20-मिनट सेंट्रीफ्यूजेशन सतह पर तैरनेवाला हटा दें, यदि वर्षा दिखाई दी, तो केन्द्रापसारक फिर से।हाइड्रोथोरैक्स और मस्तिष्कमेरु द्रव का संचालन इसके संदर्भ में।
• सेल संस्कृति सतह पर तैरनेवालास्रावी घटकों का पता लगाएं, एक बाँझ कंटेनर पर मुकदमा इकट्ठा करें, 2000-3000 आरपीएम की गति से 20-मिनट केंद्रापसारक हटा दें, कोशिकाओं की संरचना का पता लगाएं, पीबीएस (पीएच 7.2-7.4) के साथ पतला सेल निलंबन, सेल एकाग्रता 1 मिलियन तक पहुंच गया / एमएल, बार-बार फ्रीज-पिघलना चक्र, क्षति कोशिकाओं और इंट्रासेल्युलर घटकों की रिहाई, सेंट्रीफ्यूजेशन 20-मिनट 2000-3000 आरपीएम की गति से सतह पर तैरनेवाला हटा दें, यदि वर्षा दिखाई दी, तो केन्द्रापसारक फिर से।
• ऊतक के नमूने- नमूने काटने के बाद, वजन की जांच करें, पीबीएस (पीएच 7.2-7.4) जोड़ें, तरल नाइट्रोजन के साथ तेजी से जमे हुए, पिघलने के बाद 2-8 ℃ पर नमूने बनाए रखें, पीबीएस (पीएच 7.4) जोड़ें, हाथ या ग्राइंडर द्वारा समरूप, सेंट्रीफ्यूजेशन 200-3000 आरपीएम की गति से 20-मिनट सतह पर तैरनेवाला हटा दें ।
• नमूना संग्रह के बाद जितनी जल्दी हो सके निकालें, और प्रासंगिक साहित्य के अनुसार, और निष्कर्षण के बाद जितनी जल्दी हो सके प्रयोग किया जाना चाहिए।यदि ऐसा नहीं हो सकता है, तो नमूना -20 ℃ में संरक्षित करने के लिए रखा जा सकता है, बार-बार फ्रीज-पिघलना चक्र से बचें।
• NaN3 वाले नमूने का पता नहीं लगा सकता, क्योंकि NaN3 सक्रिय HRP को रोकता है।

सिद्धांत

यह एलिसा किट विधि के रूप में सैंडविच-एलिसा का उपयोग करती है।इस किट में प्रदान की गई माइक्रोएलिसा स्ट्रिपप्लेट को विशिष्ट एंटीबॉडी के साथ पूर्व-लेपित किया गया हैIL2R.मानकों या नमूनों को उपयुक्त माइक्रोएलिसा स्ट्रिपप्लेट कुओं में जोड़ा जाता है और विशिष्ट एंटीबॉडी के साथ जोड़ा जाता है।फिर एक हॉर्सरैडिश पेरोक्साइड (एचआरपी) - संयुग्मित एंटीबॉडी विशिष्ट के लिएIL2Rप्रत्येक माइक्रोएलिसा स्ट्रिपप्लेट में अच्छी तरह से जोड़ा जाता है और इनक्यूबेट किया जाता है।मुक्त घटक धुल जाते हैं।टीएमबी सब्सट्रेट समाधान प्रत्येक कुएं में जोड़ा जाता है।केवल वे कुएँ जिनमेंIL2Rऔर एचआरपी संयुग्मित थ्रोम्बोमोडुलिन एंटीबॉडी नीले रंग में दिखाई देंगे और फिर स्टॉप सॉल्यूशन को जोड़ने के बाद पीले हो जाएंगे।ऑप्टिकल घनत्व (OD) को 450 एनएम के तरंग दैर्ध्य पर स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक रूप से मापा जाता है।OD मान की सांद्रता के समानुपाती होता हैIL2R.आप की एकाग्रता की गणना कर सकते हैंIL2Rनमूनों के OD की तुलना मानक वक्र से करके नमूनों में।

टिप्पणियाँ:

• प्राप्त होने पर किट को 4 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें। किट को परख से पहले कमरे के तापमान में संतुलित किया जाना चाहिए।IL2R एंटीबॉडी-लेपित प्लेट से किसी भी अनावश्यक स्ट्रिप्स को हटा दें, उन्हें ज़िप-लॉक फ़ॉइल में फिर से सील करें और 4 डिग्री सेल्सियस पर रखें।
• केंद्रित धुलाई बफर में अवक्षेप दिखाई दे सकते हैं।कृपया सभी अवक्षेपों को भंग करने के लिए बफर को गर्म करें, जो परिणामों को प्रभावित नहीं करेगा।
• प्रायोगिक त्रुटि से बचने के लिए सटीक पिपेट का उपयोग किया जाना चाहिए।नमूने 5 मिनट से कम समय में माइक्रोप्लेट में जोड़े जाने चाहिए।यदि बड़ी संख्या में नमूने शामिल हैं, तो एकाधिक चैनल पिपेट की अनुशंसा की जाती है।
• प्रत्येक परख में मानक वक्र को शामिल किया जाना चाहिए।प्रतिकृति कुओं की सिफारिश की जाती है।यदि नमूने का OD मान मानकों के पहले कुएं से अधिक है, तो कृपया परीक्षण से पहले नमूने (n बार) को पतला करें।मूल थ्रोम्बोमोडुलिन एकाग्रता की गणना करते समय, कृपया कुल कमजोर पड़ने वाले कारक (XnX5) को गुणा करें।
• क्रॉस-संदूषण से बचने के लिए, माइक्रोप्लेट सीलर्स केवल एक बार उपयोग के लिए हैं।
• कृपया सब्सट्रेट को प्रकाश से दूर रखें।
• सभी ऑपरेशन निर्माता के निर्देशों के अनुसार सख्ती से होना चाहिए।माइक्रोटिटर प्लेट रीडर द्वारा निर्धारित परिणाम।
• सभी नमूनों, वाशिंग बफर और कचरे को संक्रामक एजेंट के रूप में माना जाना चाहिए।
• विभिन्न लॉट के अभिकर्मकों को मिश्रित नहीं किया जाना चाहिए।