• अभिकर्मकों को तैयार करें: 19 मात्रा में आसुत जल के साथ 1 मात्रा केंद्रित वाशिंग बफर (20×) पतला करें, अच्छी तरह मिलाएं।
• नमूने जोड़ें: पन्नी थैली खोलें और माइक्रोप्लेट निकालें। 1 अच्छी तरह से रिक्त, 2 अच्छी तरह से नकारात्मक नियंत्रण के रूप में, 2 अच्छी तरह से सकारात्मक नियंत्रण के रूप में स्थापित करें। 50μL नमूना पतला करने के बाद,50μL नमूना या नकारात्मक नियंत्रण या सकारात्मक नियंत्रण को संबंधित कुओं में वितरित करेंप्लेट को धीरे-धीरे हिलाना।
• इनक्यूबेट करें: माइक्रोप्लेट को प्लेट कवर से ढक लें और थर्मोस्टेट नियंत्रित पानी के स्नान या माइक्रोप्लेट इनक्यूबेटर में 37°C पर 60 मिनट तक कोटेड माइक्रोप्लेट को इनक्यूबेट करें।
• प्लेट को धोएं: प्लेट का ढक्कन हटा दें। सभी कुओं की सामग्री को सांस लें। कुओं को पतला वाशिंग बफर (10 ~ 20 सेकंड तक भिगोने के लिए) से भरें और फिर से सांस लें।प्रक्रिया को 5 बार दोहराएं- सुनिश्चित करें कि आराम की मात्रा न्यूनतम है, अवशोषक कागज पर प्लेट को टैप करके।
• संयोजक जोड़ेंः प्रत्येक कुएं में 100μL संयोजक जोड़ें (खाली कुएं को छोड़कर) ।
• इनक्यूबेट करें: माइक्रोप्लेट को ढक लें और प्लेट को 37°C पर 30 मिनट तक इनक्यूबेट करें।
• प्लेट धोएं: चरण 4 में धोने की प्रक्रिया दोहराएं।
• सब्सट्रेट जोड़ेंः प्रत्येक कुएं में सब्सट्रेट सॉल्यूशन ए और सब्सट्रेट सॉल्यूशन बी के 50μL जोड़ें, अच्छी तरह से मिलाएं। कवर करें और 30 मिनट के लिए 37°C पर इनक्यूबेट करें।
• रोक प्रतिक्रियाः प्रत्येक कुएं में 50μL रोक समाधान जोड़ें, अच्छी तरह से मिश्रण करें।
• 450 एनएम पर अवशोषण को पढ़ें. यदि दोहरी तरंग दैर्ध्य माप का प्रयोग किया जाता है, तो संदर्भ तरंग दैर्ध्य 620 एनएम से 690 एनएम के बीच चुना जाना चाहिए.

सावधानी

• उपयोग से पहले किट के सभी घटकों को कमरे के तापमान तक पहुंचने दें।
• प्रतिक्रिया तापमान और समय को सख्ती से नियंत्रित करने के लिए दिशा सम्मिलन का पालन करें।
• प्रयोग करने के लिए अलग-अलग लॉट नंबरों के घटकों को न मिलाएं।
• किट को 2-8°C पर रखा जाना चाहिए। किट के घटकों का उपयोग उनकी समाप्ति तिथि के बाद न करें।