एंटीबॉडी (IgE) ELISA टेस्ट किट

नियत उपयोग

  यह किट मानव सीरम/प्लाज्मा में कुल आईजीई एंटीबॉडी (आईजीई) का मात्रात्मक पता लगाने वाला है। यह परिणाम टाइप I एलर्जी के निदान में सहायता कर सकता है।संदिग्ध परजीवी रोगों वाले रोगियों के लिए भी कुल IgE परीक्षण की सिफारिश की जा सकती है.

परीक्षण का सिद्धांत

  तत्काल अतिसंवेदनशीलता (टाइप I एलर्जी) विशिष्ट IgE द्वारा मध्यस्थता की जाती है। 6 से 15 वर्ष की आयु के बीच सामान्य सीरम में IgE की एकाग्रता चरम पर पहुंच जाती है।रोगियों में विशिष्ट IgE की वृद्धि कुल IgE टाइटर की वृद्धि के साथ होती हैइस मामले में, टाइटर 1,000 गुना तक बढ़ सकता है। सामान्य तौर पर, प्रति मिलीलीटर (आईयू/एमएल) अंतर्राष्ट्रीय इकाइयों को परिभाषित किया जाता हैः 1 आईयू/एमएल 2.4 एनजी आईजीई के बराबर है। वंशानुगत एलर्जी त्वचाशोथ वाले रोगियों में,IgE का स्तर 50 तक हो सकता हैइसके अतिरिक्त परजीवी रोगों वाले रोगियों में IgE टाइटर बढ़ जाते हैं। सामान्य से अधिक परीक्षण परिणामों में पुष्टि की गई ऑटोइम्यून बीमारियों के प्रभाव को भी ध्यान में रखना चाहिए।

अभिकर्मक स्वस्थ लोगों की शारीरिक जांच के लिए अनुशंसित नहीं है, केवल संबंधित IgE एंटीबॉडी परीक्षण के सकारात्मक या नकारात्मक परिणामों के लिए सकारात्मक या नकारात्मक परीक्षण के परिणाम,अनिश्चितता रोगी के साथ सहसंबंध बीमार है और रोगियों के मूल्यांकन के एकमात्र सूचकांक के रूप में नहीं हो सकता है, रोग के एकीकृत विश्लेषण के लिए रोगी की नैदानिक प्रस्तुति और अन्य प्रयोगशाला परीक्षणों के साथ संयुक्त होना चाहिए।

इस किट का पता लगाने की विधि एंजाइम-लिंक्ड इम्यूनोएसे है। इस अभिकर्मक में, डबल एंटीबॉडी सैंडविच इम्यूनोएसे के सिद्धांत को अपनाया गया था।एंटी-आईजीई को पहचानने वाले मोनोक्लोनल एंटीबॉडीज को माइक्रोप्लेट के कुओं में पूर्व-कोटेड किया गया था, और मानव सीरम/प्लाज्मा के नमूनों और एंजाइम लेबल वाले एक अन्य मोनोक्लोनल एंटीबॉडी को प्लेट के छिद्रों में जोड़ा गया। इनक्यूबेशन और धोने के बाद, सब्सट्रेट समाधान जोड़ा गया।ओडी मूल्य को पढ़ा गया और इसकी सामग्री को माइक्रोप्लेट रीडर द्वारा गणना की गई.

परीक्षण प्रक्रिया

1.सभी अभिकर्मकों को उपयोग से पहले 15 मिनट के लिए कमरे के तापमान तक पहुंचने दिया जाना चाहिए।

2उपयोग से पहले वाश बफर को 1:40 की दर से आसुत पानी से पतला करें।

3नमूना सूक्ष्म प्लेट की संख्या के अनुरूप होना चाहिए, प्रत्येक प्लेट को संदर्भ कुओं के साथ प्रदान किया जाना चाहिए (कुओं की संख्या संदर्भ और परीक्षण किए जाने वाले नमूने से निर्धारित की जाती है) ।

नोटः प्रत्येक नमूना के लिए एक अलग निपटान पाइपेट टिप का प्रयोग करें, प्रत्येक संदर्भ क्रॉस संदूषण से बचने के लिए।

4.अनुरूप कुएं में 100μL नमूना पतला करने वाला पदार्थ जोड़ें, प्रत्येक संदर्भ S0, S1, S2, S3, S4, S5 और नमूना को क्रमशः 20μL संबंधित कुएं में जोड़ें।

5. मिश्रण के लिए धीरे-धीरे हिलाएं. 37°C पर 30 मिनट तक इनक्यूबेट करें।

6. इनक्यूबेशन के अंत में, प्लेट कवर को हटा दें और फेंक दें. बाहर निकालें, 10 सेकंड के लिए प्रत्येक कुएं में वॉश बफर जोड़ें. 5 बार दोहराएं. अंतिम वॉशिंग चक्र के बाद, आप अपने बालों को धो सकते हैं।प्लेट को ब्लूटूथ पेपर या साफ तौलिया पर घुमाएं, और किसी भी अवशेष को हटाने के लिए इसे टैप करें।

7. क्रमशः 100μL कन्जुगेट जोड़ना। 37°C पर 30 मिनट तक इनक्यूबेट करें और सीलिंग प्लेट के झिल्ली को सील करें।

8- चरण 6 के रूप में प्लेट धोएं।

9. सब्सट्रेट ए (50μL) और सब्सट्रेट बी (50μL) जोड़ें। मिश्रण करने के लिए धीरे-धीरे हिलाएं। सीलिंग प्लेट झिल्ली के साथ 10 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट करें।

10. प्रत्येक कुएं में 50μL स्टॉप सॉल्यूशन डालें। धीरे-धीरे हिलाकर मिलाएं, प्रतिक्रिया को रोकने के बाद 10 मिनट के भीतर अवशोषण पढ़ें।फिर माइक्रोप्लेट रीडर से 450nm/630nm पर अवशोषण मूल्य पढ़ें।- एकाग्रता की गणना करें और परिणामों का मूल्यांकन करें।