25-ओएच विटामिन डी एलिसा टेस्ट किट

नियत उपयोग

25-OH विटामिन डी के लिए डिटेक्शन किट (एंजाइम-लिंक्ड इम्यूनोसॉर्बेंट एसे, ELISA) । इसका उपयोग मानव सीरम में विटामिन डी के मात्रात्मक परीक्षणों में किया जाता है।

सारांश और नैदानिक महत्व

विटामिन डी एक वसा में घुलनशील हार्मोन पूर्ववर्ती है जो मुख्य रूप से सूर्य के प्रकाश के संपर्क में आने से त्वचा में निर्मित होता है। विटामिन डी जैविक रूप से निष्क्रिय है और सक्रिय होने के लिए हाइड्रॉक्सिलेशन चरणों से गुजरना पड़ता है।हमारा शरीर केवल विटामिन डी3 का संश्लेषण कर सकता हैविटामिन डी2 समृद्ध भोजन के साथ या पूरक आहार के द्वारा लिया जाता है।विटामिन डी3 और डी2 प्लाज्मा में विटामिन डी-बाइंडिंग प्रोटीन (वीडीबीपी) से बंधते हैं और 25-हाइड्रोक्सी विटामिन डी (25-ओएच विटामिन डी) बनने के लिए यकृत में ले जाया जाता हैचूंकि 25-OH विटामिन डी मुख्य भंडारण रूप है, इसलिए इसके रक्त एकाग्रता का उपयोग विटामिन डी की समग्र स्थिति का आकलन करने के लिए किया जाता है।25-OH विटामिन डी3 है जबकि 25-OH विटामिन डी2 केवल विटामिन डी2 की खुराक लेने वाले रोगियों में मापने योग्य स्तर तक पहुंचता है. हड्डियों के स्वास्थ्य के लिए विटामिन डी आवश्यक है। बच्चों में, गंभीर कमी के कारण रकीट होता है। बुजुर्गों में मांसपेशियों की कमजोरी के कारण विटामिन डी की कमी के कारण गिरने का खतरा होता है।,कम 25-ओएच विटामिन डी सांद्रता कम हड्डी खनिज घनत्व से जुड़ी होती है। अपर्याप्तता मधुमेह, कैंसर, हृदय रोग और ऑटोइम्यून रोगों से भी जुड़ी हुई है।विटामिन डी के दोनों आहार पूरक जो वर्तमान में बाजार में उपलब्ध हैं (विटामिन डी 2 और विटामिन डी 3) को जिगर में 25-ओएच विटामिन डी में परिवर्तित किया जाता हैसीरम या प्लाज्मा में 25-ओएच विटामिन डी2 और 25-ओएच विटामिन डी3 की सांद्रता का योग कुल 25-ओएच विटामिन डी कहा जाता है।क्लिनिकल सेटिंग्स में कुल 25-OH विटामिन डी स्तर की सटीक निगरानी महत्वपूर्ण है।. Vitamin D deficient patients who are prescribed a daily Vitamin D supplement should regularly monitor their serum or plasma Vitamin D levels in order to reach an optimal level and prevent their 25-OH Vitamin D concentrations from reaching excessive levels that are considered toxicविटामिन डी कुल परीक्षण में विशेष एंटीबॉडी का उपयोग 25-हाइड्रोक्सीविटामिन डी3 और डी2 दोनों को पकड़ने के लिए किया जाता है।यह परीक्षण मानव सीरम और प्लाज्मा में कुल 25-OH विटामिन डी के मात्रात्मक निर्धारण के लिए है।विटामिन डी की पर्याप्तता का आकलन करने में सहायता के रूप में।

सिद्धांत

25-ओएच विटामिन डी मात्रात्मक परीक्षण किट ठोस चरण एंजाइम-लिंक्ड इम्यूनोसॉर्बेंट परीक्षण पर आधारित है।परीक्षण प्रणाली ठोस चरण (microtiter कुओं) स्थिरीकरण के लिए एक एंटीबॉडी और समाधान में एक और मोनोक्लोनल एंटीबॉडी का उपयोग करती हैतीसरा एंटीबॉडी जो किसी एंजाइम (हर्सरेडिस पेरोक्सिडेस) के साथ संयुग्मित दूसरे एंटीबॉडी को पहचानता है।मानक और परीक्षण नमूना (सीरम) 25-OH विटामिन डी एंटीबॉडी लेपित microtiter कुओं में जोड़ा जाता है, दूसरे एंटीबॉडी के साथ 30 मिनट के लिए इनक्यूबेशन। धोने के बाद, तृतीय एंटीबॉडी जोड़ी जाती है, जिसे हॉर्सरेडिस पेरोक्सीडेस (कंज्यूगेट) के साथ लेबल किया जाता है। यदि मानव 25-ओएच विटामिन डी नमूने में मौजूद है,यह कुएं पर एंटीबॉडी और एंजाइम संयुग्मित के साथ मिलकर ठोस चरण और एंजाइम-लिंक्ड एंटीबॉडी के बीच सैंडविच का गठन करेगा।चिह्नित अनबाउंड एंटीबॉडी को हटाने के लिए कुओं को पानी से धोया जाता है. टीएमबी का एक समाधान जोड़ा जाता है और 20 मिनट तक इनक्यूबेट किया जाता है, जिसके परिणामस्वरूप एक नीला रंग विकसित होता है। स्टॉप सॉल्यूशन के साथ रंग विकास को रोक दिया जाता है।रंग पीले रंग में बदल जाता है और 450 एनएम पर स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिकली मापा जाता हैविटामिन डी की सांद्रता परीक्षण नमूना की रंग तीव्रता के सीधे आनुपातिक है।

आपूर्ति किए गए अभिकर्मक

लेपित माइक्रोप्लेट: 1 प्लेट (8×12 कुएं), उपयोग के लिए तैयार मोनोक्लोनल एंटी- 25-OH विटामिन डी एंटीबॉडी लेपित माइक्रोटाइटर प्लेट और एक एल्यूमीनियम बैग में सील।खोले जाने के बाद नमी से बचाने के लिए सूखी सामग्री के साथ फिर से बंद करने योग्य बैग में स्ट्रिप्स निकालें2. समाप्ति तिथि तक 2 से 8° पर रखें।

एचआरपी संयुग्मितःउपयोग के लिए तैयार 22 मिलीलीटर का 1 शीशी, 2 से 8°C पर समाप्ति तिथि तक रखें।

कैलिब्रेटर:0. 2 मिलीलीटर के 6 फ्लायल्स पर S0 से S5 के साथ लेबल किया गया है और PRL की एकाग्रता 0, 10, 20, 50,1002 ~ 8°C पर समाप्ति तिथि तक रखें।

नियंत्रणः0. 2 मिलीलीटर के 2 शीशी।

विटामिन डी नमूना द्रवः22 मिलीलीटर का 1 फ्लास्क, उपयोग करने के लिए तैयार है।

टीएमबी सब्सट्रेटः1 12 मिलीलीटर का फ्लास्क, उपयोग के लिए तैयार है, समाप्ति तिथि तक 2 ~ 8°C पर रखें।

रोकें समाधानः1 12 मिलीलीटर का फ्लास्क, उपयोग के लिए तैयार है, समाप्ति तिथि तक 2 ~ 8°C पर रखें।

वाश बफर:15 मिलीलीटर का 1 फ्लास्क, 50 गुना केंद्रित करें, परीक्षण से पहले डीआयनयुक्त पानी से पतला करें। समाप्ति तिथि तक 2 ~ 8 डिग्री सेल्सियस पर रखें।

प्लेट सीलर:दो टुकड़े।

प्लास्टिक की फिर से बंद करने योग्य थैलीःएक सेट।

निर्देश पुस्तिका:एक प्रति।

तैयारी

1सभी नमूनों और अभिकर्मकों को कमरे के तापमान (~ 25°C) तक पहुंचने दें और उपयोग से पहले धीरे-धीरे उल्टा करके अच्छी तरह से मिलाएं।

2धोने के लिए बफर तैयार करें धोने के लिए एकाग्रता को 20 गुना डिआयनयुक्त पानी से पतला करें। पतला धोने का घोल कम से कम एक सप्ताह के लिए कमरे के तापमान पर स्थिर रहता है।

प्रयोक्ताओं के लिए सावधानी

1- हाथ से किसी भी प्रकार के मुंह से पाइपेटिंग को रोकना चाहिए। प्रत्येक नमूने के लिए केवल एक बार में इस्तेमाल होने वाले टिप्स वाले पाइपेट्स का उपयोग करें।

2विभिन्न मास्टर लोटों से सामग्री न मिलाएं। समाप्ति तिथि के बाद किट घटकों का उपयोग न करें।

3सभी सामग्रियों को उपयोग से पहले कमरे के तापमान पर लाया जाना चाहिए।