हेपेटाइटिस बी वायरस कोर एंटीजन (एचबीसीएबी) के लिए एंटीबॉडी

एलिसा टीइस्टकयह

केवल इन विट्रो डायग्नोस्टिक और पेशेवर उपयोग के लिए।

उत्पाद का नाम

एंटी-एचबीसी एलिसा टेस्ट किट (सीरम/प्लाज्मा)

नियत उपयोग

यह एंटी-एचबीसी एलिसा टेस्ट किट मानव सीरम/प्लाज्मा में हेपेटाइटिस बी वायरस कोर एंटीजन (एचबीसीएबी) के लिए एंटीबॉडी का गुणात्मक पता लगाने है।यह अभिकर्मक मानव सीरम/प्लाज्मा में हेपेटाइटिस बी वायरस संक्रमण की नैदानिक जांच और निदान के लिए उपयुक्त है.

परीक्षण सिद्धांत

हेपेटाइटिस बी वायरस (एचबीवी) एक लिफाफा है,हेपडनावायरिडे परिवार से संबंधित डबल-स्ट्रैंड डीएनए वायरस और हेपेटाइटिस सी वायरस (एचसीवी) के साथ-साथ रक्त से संचारित हेपेटाइटिस के प्रमुख कारण के रूप में मान्यता प्राप्त हैएचबीवी से संक्रमण हल्के, अस्पष्ट रोग से लेकर फुलमिनेट हेपेटाइटिस, गंभीर पुरानी यकृत रोगों तक के नैदानिक लक्षणों का एक स्पेक्ट्रम पैदा करता है।जो कुछ मामलों में जिगर के सिरोसिस और कार्सिनोमा का कारण बन सकता हैहेपेटाइटिस बी संक्रमण के वर्गीकरण के लिए संक्रमण के तीन चरणों (अवरोधक, तीव्र और वसूली) के दौरान व्यक्त कई सीरोलॉजिकल मार्करों की पहचान की आवश्यकता होती है।

वायरस का मुख्य घटक हेपेटाइटिस बी कोर एंटीजन (HBcAg) है।इस कोर एंटीजन में लगभग 17kD का एक एकल पॉलीपेप्टाइड होता है जो कोर कणों के विघटन पर उत्सर्जित होता है।एंटीजन में कम से कम एक प्रतिरक्षा निर्धारक होता है।

एचबीएसएजी की शुरुआत के तुरंत बाद, एचबीसीएजी के प्रति एंटीबॉडी (एंटी-एचबीसी कुल एंटीबॉडी और आईजीएम) दिखाई देते हैं और कभी नहीं जाते हैं।हेपेटाइटिस बी संक्रमण प्रतिरक्षा से पता लगाने योग्य एंटी-एचबीसी के बिना हो सकता है. यह आमतौर पर प्रतिरक्षा दमित रोगियों में पाया जाता है। एंटी-एचबीसी की जांच से विभिन्न आबादी में हेपेटाइटिस बी के प्रसार पर डेटा मिलता है।दीर्घकालिकएचबीवी संक्रमण का पता लगाना महत्वपूर्ण है जब एक नैदानिक सेटिंग में निदान किया जा रहा है। अन्य हेपेटाइटिस बी परीक्षणों के साथ, एचबीवी के लिए एंटी-एचबीसी की पहचान करना महत्वपूर्ण है।एंटी-एचबीसी मार्कर सही निदान और वायरस की प्रगति की उचित निगरानी की अनुमति देता हैएंटी-एचबीसी संभवतः हेपेटाइटिस बी संक्रमण का एकमात्र संकेतक हो सकता है (एचबीएसएजी-नकारात्मक रोगियों के अन्य परीक्षणों सहित) ।

एचबीसीएबी एलिसा परीक्षण की प्रणाली ठोस चरण, एक-चरण ऊष्मायन प्रतिस्पर्धी सिद्धांत पर आधारित है।यह माइक्रोप्लेट में पूर्व-कोटेड शुद्ध एचबीसीएजी की एक निश्चित मात्रा के लिए हॉर्सरेडिस पेरोक्सिडेस (एचआरपी-कंज्यूगेट) के साथ मोनोक्लोनल एंटी-एचबीसी के साथ प्रतिस्पर्धा करता हैयदि कोई एंटी-एचबीसी मौजूद नहीं है, तो एचआरपी-संयुग्मित एंटी-एचबीसी कुओं के अंदर एंटीजन के साथ एक साथ बंधेगा। धोने के दौरान, कोई भी अनबाउंड एचआरपी-संयुग्मित हटा दिया जाता है।क्रोमोजेन समाधान A और B को कुओं में और इनक्यूबेशन के दौरान जोड़ने के बाद, एक नीले रंग का उत्पाद दिखाई देता है। सल्फ्यूरिक एसिड के साथ प्रतिक्रिया को रोकने के बाद, नीला रंग पीला हो जाता है। नमूने में एचबीसीएजी के लिए एंटीबॉडी की उपस्थिति कम रंग से इंगित की जाती है,या कोई रंग मौजूद नहीं.

नमूना आवश्यकताएं

1.नमूना संग्रहःकिसी विशेष रोगी की तैयारी की आवश्यकता नहीं है। सामान्य प्रयोगशाला अभ्यास के अनुसार नमूना एकत्र करें। या तो ताजा सीरम/प्लाज्मा नमूनों का उपयोग इस परीक्षण के साथ किया जा सकता है।वेन्यूपंक्चर द्वारा एकत्रित रक्त को स्वाभाविक रूप से और पूरी तरह से थक्के लगने देना चाहिए ️ सीरम को रक्त के थक्के से जितनी जल्दी हो सके अलग किया जाना चाहिए ताकि लाल रक्त के हीमोलिसिस से बचा जा सकेयह सुनिश्चित करने के लिए सावधानी बरती जानी चाहिए कि सीरम/प्लाज्मा नमूने स्पष्ट हों और सूक्ष्मजीवों से दूषित न हों।

2.Hअति लिपेमिक, जकड़न, या हेमोलिटिक नमूनों का परीक्षण नहीं किया जाना चाहिए प्रयुक्तक्योंकि वे परीक्षण में झूठे परिणाम दे सकते हैं।गर्मी निष्क्रिय न करें नमुनेयह लक्ष्य विश्लेषण के बिगड़ने का कारण बन सकता है। सूक्ष्मजीवों से दूषित दिखाई देने वाले नमूनों का कभी भी उपयोग नहीं किया जाना चाहिए।

3एचबीसीएबी एलिसा केवल व्यक्तिगत सीरम/प्लाज्मा नमूनों के परीक्षण के लिए है। परीक्षण का उपयोग शव के नमूनों, लार, मूत्र या अन्य शरीर तरल पदार्थों, या एकत्रित (मिश्रित) रक्त के परीक्षण के लिए न करें।

4परिवहन और भंडारणः नमूनों को 2-8°C पर रखें। जिन नमूनों को 3 दिनों के भीतर परीक्षण के लिए आवश्यक नहीं है, उन्हें जमे हुए (-20°C या उससे कम) में संग्रहीत किया जाना चाहिए। कई जमे हुए-तलना चक्रों से बचना चाहिए।शिपमेंट के लिएक्लीनिकल नमूनों और एथोलॉजिकल एजेंटों के परिवहन के लिए मौजूदा स्थानीय और अंतरराष्ट्रीय नियमों के अनुसार पैकेज और लेबल किए जाने चाहिए।

परीक्षण प्रक्रिया

1सभी अभिकर्मकों को उपयोग से पहले 15 मिनट के लिए कमरे के तापमान तक पहुंचने दिया जाना चाहिए।

2उपयोग से पहले वाश बफर को 1:40 की दर से आसुत पानी से पतला करें।

3नमूना माइक्रोप्लेट की संख्या के अनुरूप होना चाहिए, प्रत्येक प्लेट में नकारात्मक नियंत्रण 3 कुएं, सकारात्मक नियंत्रण 2 कुएं और रिक्त नियंत्रण 1 कुएं दिए जाने चाहिए।(यदि दोहरी तरंग दैर्ध्य पता लगाने के साथ पता चलता है, कोई रिक्त नियंत्रण कुंड सेट करने की अनुमति नहीं है) ।

नोटः क्रॉस संदूषण से बचने के लिए प्रत्येक नमूना, नकारात्मक और सकारात्मक नियंत्रण के लिए एक अलग निपटान पाइपेट टिप का प्रयोग करें।

4. 50μL नमूने को संबंधित कुएं में डालें (जब इस किट का उपयोग क्लिनिकल सहायक निदान के लिए किया जाता है, तो परीक्षण के लिए परीक्षण किए जाने वाले नमूने को 1:30 पर सामान्य लवण के साथ पतला किया जाना चाहिए।जब इसका प्रयोग महामारी विज्ञान संबंधी जांच के लिए किया जाता है, मूल नमूना का पता लगाया जा सकता है ), नकारात्मक नियंत्रण कुओं और सकारात्मक नियंत्रण कुओं में 50μL नकारात्मक नियंत्रण और सकारात्मक नियंत्रण जोड़ें।क्रमशः एंजाइम कन्जुगेट 50μL जोड़ना (खाली कुँए में न जोड़ें).

5. एक ऑसिलेटर के साथ 30 सेकंड के लिए हिलाएं (यह कदम बहुत महत्वपूर्ण है) 37 डिग्री सेल्सियस पर 30 मिनट के लिए इनक्यूबेट करें, सीलिंग प्लेट झिल्ली प्लेट को सील करती है।

6. इनक्यूबेशन के अंत में, प्लेट कवर को हटा दें और फेंक दें. बाहर निकालें, 20 सेकंड के लिए प्रत्येक कुएं में वॉश बफर जोड़ें. 5 बार दोहराएं. अंतिम वॉशिंग चक्र के बाद, प्रत्येक कुएं में वॉश बफर डालें।प्लेट को ब्लूटूथ पेपर या साफ तौलिया पर घुमाएं, और किसी भी अवशेष को हटाने के लिए इसे टैप करें।

7. सब्सट्रेट ए (50μL) और सब्सट्रेट बी (50μL) जोड़ें (खाली कुएं में न जोड़ें). हिलाकर धीरे-धीरे मिलाएं. 37 °C पर 15 मिनट तक इनक्यूबेट करें।

8. प्रत्येक कुएं में 50μL स्टॉप सॉल्यूशन डालें (खाली कुएं में न डालें). हलचल करके धीरे-धीरे मिलाएं, प्रतिक्रिया को रोकने के बाद 10 मिनट के भीतर अवशोषण पढ़ें।खाली अच्छी तरह से प्लेट रीडर कैलिब्रेट करें और 450nm पर अवशोषण पढ़नेयदि दोहरी फ़िल्टर उपकरण का उपयोग किया जाता है, तो संदर्भ तरंग दैर्ध्य को 630 एनएम पर सेट करें। यदि दोहरी तरंग दैर्ध्य का उपयोग करने के लिए पता लगाने के लिए कोई रिक्त कुओं को सेट करने की अनुमति नहीं है। कट-ऑफ मान की गणना करें और परिणामों का मूल्यांकन करें।