2उपयोग से पहले वाश बफर को 1:40 की दर से आसुत पानी से पतला करें।
3. 100μL नमूना द्रव को संबंधित कुएं में जोड़ें (खाली कुएं में न जोड़ें, नकारात्मक
नियंत्रण कुओं और सकारात्मक नियंत्रण कुओं) नमूना सूक्ष्म के बराबर होना चाहिए
प्लेट, प्रत्येक प्लेट नकारात्मक नियंत्रण के साथ प्रदान किया जाना चाहिए 2 कुओं, सकारात्मक नियंत्रण 1 अच्छी तरह से और रिक्त
नियंत्रण 1 कुएं में 5μL नमूना जोड़ें, पाइपेट का उपयोग करके अच्छी तरह से मिलाएं, जोड़ें
50μL नकारात्मक नियंत्रण और सकारात्मक नियंत्रण नकारात्मक नियंत्रण कुओं और सकारात्मक नियंत्रण कुओं के लिए (नहीं
खाली कुएं में जोड़ें) ।
नोटः प्रत्येक नमूना, नकारात्मक और सकारात्मक नियंत्रण के लिए एक अलग निपटान पाइपेट टिप का उपयोग करें
क्रॉस संदूषण से बचें।
4. 30 सेकंड के लिए मिश्रण करने के लिए धीरे-धीरे हिलाएं। सीलिंग प्लेट झिल्ली के साथ 37°C पर 20 मिनट तक इनक्यूबेट करें
प्लेट को सील कर रहा है।
5. इनक्यूबेशन के अंत में, प्लेट कवर को हटा दें और फेंक दें.
20 सेकंड के लिए प्रत्येक अच्छी तरह से। 5 बार दोहराएं। अंतिम धोने के चक्र के बाद, प्लेट को चालू करें
वाशिंग पेपर या साफ तौलिया, और किसी भी अवशेष को हटाने के लिए इसे टैप करें।
6क्रमशः एंजाइम कन्जुगेट 50μL जोड़ना (खाली कुएं में न जोड़ें)
7. 37°C पर 20 मिनट तक इनक्यूबेट करें और सीलिंग प्लेट के झिल्ली से प्लेट को सील करें।
चरण 5 में 5 बार धोने के लिए कदम।
8. सब्सट्रेट ए 50μL और सब्सट्रेट बी 50μL जोड़ें (खाली कुएं में न जोड़ें) 37 °C पर इनक्यूबेट करें
10 मिनट के लिए सीलिंग प्लेट झिल्ली प्लेट सील।
9. प्रत्येक कुँए में 50μL स्टॉप सॉल्यूशन डालें (खाली कुँए में न डालें) । हिलाकर धीरे-धीरे मिलाएं,
प्रतिक्रिया बंद करने के बाद 10 मिनट के भीतर अवशोषण।
अच्छी तरह से और 450nm पर अवशोषण को पढ़ें। यदि एक दोहरी फिल्टर उपकरण का उपयोग किया जाता है, संदर्भ सेट
630nm पर तरंग दैर्ध्य सेट कोई रिक्त अच्छी तरह से अनुमति नहीं है यदि दोहरी तरंग दैर्ध्य का उपयोग करने के लिए पता लगाने के लिए।
कट-ऑफ मूल्य और परिणामों का मूल्यांकन करें।
क्रोनोमेट्रीः माइक्रो प्लेट रीडर से 450 एनएम पर नमूना का ऑप्टिकल घनत्व (ओडी) पढ़ें।
औसत नकारात्मक नियंत्रण ओडी मान ≤ 0.1 और औसत सकारात्मक नियंत्रण ओडी मान ≥ 0.8, परीक्षण मान्य है,
अन्यथा परीक्षण अमान्य है।
कट-ऑफ मूल्य (सी.ओ.) = नकारात्मक नियंत्रण का औसत ओडी मूल्य x 3 (0.10 से गणना की जाती है जब औसत
नकारात्मक नियंत्रण का ओडी मान < 0 है।10, वास्तविक मूल्य के आधार पर गणना की जाती है जब औसत नकारात्मक नियंत्रण ओडी
मान > 0.10)
सकारात्मक परिणाम: नमूना ओडी मूल्य ≥ सी.ओ.
आपका संदेश 20-3,000 अक्षरों के बीच होना चाहिए!
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