1.मिक्रोवेल्स की वांछित संख्या की गणना करें। शेष माइक्रोवेल्स निकालें और उन्हें सूखी सामग्री के साथ
पुनः बंद करने योग्य प्लास्टिक बैग, सील और बाद में उपयोग के लिए 2-8°C पर स्टोर करें।
2कैलिब्रेटर और नमूने जोड़ें:
2. 1 खाली कुँआः अभिकर्मकों को न जोड़ें.
2. 2 कैलिब्रेटर कुएं: निर्दिष्ट नियंत्रण कुओं में 100 μL कैलिब्रेटर डालें।
2.3 परीक्षण कुएं: परीक्षण कुओं में 100 यूएल नमूना द्रवित करें, फिर संबंधित कुएं में 10 यूएल नमूना जोड़ें।
2.4 20 सेकंड के लिए प्लेट को धीरे से हिलाएं और फिर प्लेट को सीलर से कवर करें।
3इनक्यूबेट करेंः प्लेट को 37°C पर 30 मिनट तक इनक्यूबेट करें।
4. धोने का चरण (मनुअल या स्वचालित धोने के साथ किया जा सकता है):
मैन्युअल धुलाईः समाधान को कचरे के कंटेनर में डालकर इनक्यूबेशन मिश्रण को सावधानीपूर्वक निकालें।
350 μL पतले वाश बफर के साथ अच्छी तरह से मिलाएं और 20-30 सेकंड के लिए धीरे-धीरे हिलाएं। वाश समाधान को पूरी तरह से फेंक दें। दोहराएं 4
अंतिम धोने के बाद, अवशिष्ट तरल को हटाने के लिए अवशोषक कागज पर प्लेट को टैप करें।
स्वचालित धुलाईः स्वचालित प्लेट वॉशर को कुशल धुलाई सुनिश्चित करने के लिए कैलिब्रेट किया जाना चाहिए। प्रत्येक कुएं को 350 μL से भरें
धोने के लिए बफर को पतला करें और 20-30 सेकंड के लिए भिगो दें। सभी कुओं को पूरी तरह से सांस लें। 4 बार दोहराएं।
5संयुग्मितः रिक्त कुएं को छोड़कर प्रत्येक कुएं में 100 μL संयुग्मित जोड़ें।
6इनक्यूबेट करें: कुओं को ढक लें और 30 मिनट तक 37°C पर इनक्यूबेट करें।
7धोने का चरणः प्लेट को 5 बार धोएं जैसा कि चरण 4 में बताया गया है।
8. सब्सट्रेटः प्रत्येक कुएं में, रिक्त कुएं सहित, सब्सट्रेट ए और सब्सट्रेट बी के 50 μL जोड़ें।
20 सेकंड के लिए माइक्रोवेव, 37 डिग्री सेल्सियस पर अंधेरे में 15 मिनट के लिए इनक्यूबेट करें।
9. स्टॉप सॉल्यूशनः प्रत्येक कुएं में 50 μL स्टॉप सॉल्यूशन डालें। पॉजिटिव नमूनों वाले कुओं में पीला रंग विकसित होना चाहिए।
10. परिणाम पढ़ेंः 30 मिनट के भीतर 450/630-700 एनएम पर पढ़ें।
1नोटः माइक्रोप्लेट को 450 एनएम पर भी पढ़ा जा सकता है, लेकिन इसके लिए 450/630-700 एनएम पर पढ़ने की अत्यधिक अनुशंसा की जाती है।
बेहतर परिणाम।
क्रोनोमेट्रीः माइक्रो प्लेट रीडर से 450 एनएम पर नमूना का ऑप्टिकल घनत्व (ओडी) पढ़ें।
औसत नकारात्मक नियंत्रण ओडी मान ≤ 0.1 और औसत सकारात्मक नियंत्रण ओडी मान ≥ 0.8, परीक्षण मान्य है,
कट-ऑफ मूल्य (सी.ओ.) = नकारात्मक नियंत्रण का औसत ओडी मूल्य x 3 (0.10 से गणना की जाती है जब औसत
नकारात्मक नियंत्रण का ओडी मान < 0 है।10, वास्तविक मूल्य के आधार पर गणना की जाती है जब औसत नकारात्मक नियंत्रण ओडी
सकारात्मक परिणाम: नमूना ओडी मूल्य ≥ सी.ओ.
आपका संदेश 20-3,000 अक्षरों के बीच होना चाहिए!
Hindi
